试述外源基因表达产物的检测方法。

题目

试述外源基因表达产物的检测方法。

相似考题

1.利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是 A.基因灭活 B.基因矫正 C.基因置换 D.自杀基因的应用

2.外源基因表达的检测方法有三种（）（）（）

3.转基因植物中外源基因的存在问题：外源基因在后代中的遗传多样性和外源基因在后代中表达的（）。

4.外源基因的瞬时表达

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  • 第1题：

    转基因生物的外源基因检测方法有哪些？


    正确答案: （1）形态标记。形态标记是指在杂种后代中那些可被直接观察到的性状，如植株的茎、叶、穗、籽粒各部分大小、色泽、形状及抗病性表现等。这是检测外源基因最常用的、也是最直观的方法。一般是参照双亲的特征，根据杂咱后代的表现情况，来确定杂种后代中是否有外源基因导入。
    （2）细胞标记。细胞标记，即细胞学鉴定。通过对染色体的数目和形态特征观察、染色体带型和核型分析以及减数分裂染色体配对行为的观察，来检测外源基因。这是检测外源基因最基本、最经典的方法。
    具体包括：
    A.杂种细胞学，观察通过对杂种体细胞染色体观察，统计其染色体数目，并结合花粉母细胞减数分裂中期染色体配对行为观察，来确是否有外源基因导入。通过染色体计数和配对行为观察，很容易确定双二倍体、部分双二倍体、附加系、单体、缺体、端体等染色体的数目和类型。利用有无随体染色体，也可鉴定外源基因。
    B.核型及核型分析，核型通常是指体细胞染色体所有可测定的表型特证的总称。核型分析就是对核型的各种特征进行定量或定性的表达。核型分析的染色体，一般以体细胞分裂中期的染色体作为基本形态。在核型分析的表述格式中，一般包括染色体数目和染色体形态特征，形态特征主要包括相对长度、臂比、着丝点位置和随体的有无。染色体的分类目前采用应用最广泛的两点四区系统，我国于1984年第一届全国植物染色体学术讨论会上稍加修改后推行。根据臂比值将染色体分为正中部着丝点（M）、中部着丝点区（m）、近中部着丝点区（sm）、近端部着丝点区（st）、端部着丝点区（t）和端着丝点（T）即所谓的两点四区。
    C.染色体分带，染色体分带技术是通过一定的碱、酸、盐、温度等因素对染色体进行处理，借助Giemsa等染料染色，使染色体在一定部位呈现深浅程度不同的染色区段而形成特定的带纹，由于其带纹在各染色体上显示的位置、宽窄、大小、数目、浓淡等具有相对的稳定性，故可用来进行染色体的鉴别和分析。
    （3）生化标记。生化标记是利用电泳等技术对生物大分子，如蛋白质、酶等进行鉴定。因为蛋白质是由基因编码的，特定的基因型决定了蛋白质的特定组成，因此，不同种、属所特有的蛋白质组成能够反映出该种、属的基因型。
    具体包括：
    A、贮藏蛋白分析法，按其溶解特性可分成谷蛋白和醇溶蛋白两大类，其蛋白的亚基存在着丰富的变异类型，不受环境条件影响而能稳定遗传。
    B、同工酶分析法，同工酶是结构不同但功能相同的一类酶。在一定条件下电泳染色，同一遗传材料可同时显示几条酶带，而不同的遗传材料可具有不同的酶带。同工酶是基因的直接产物，是基因表达的结果。
    （4）分子标记。分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记之后的一种新的分子遗传标记方法，它是以DNA多态性与性状间的紧密连锁关系为基础的遗传标记，能够稳定遗传，且遗传方式比较简单，是性状基因的真实反映，能在不同发育阶段对不同组织DNA进行检测分析。目前，用于检测小麦外源基因的分子标记主要有限制性片段长度多态性（restriction fragment length length polymorphism 简称 RFLP）、随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA 简称 RAPD ）和基因组原位杂交（genomic in situ hybridization 简称 GISH）。这项新技术越来越受到重视，特别是在检测外源小片断染色时更是倍受青睐。 
    具体包括：
    A、RFLP，RFLP技术是基于不同物种、不同材料间基因组DNA的限制性内切酶识别位不同的原理，通过对基因组DNA经特定的限制性内切酶消化，产生不同大小的DNA片断，经电泳后转移到固定支撑物上，用特定的放射性标记的DNA片断（探针）杂交检测多态性。它是检测不同物种个体间基因细微差异的可靠手段，标记的数量较大，呈简单的孟德尔显性遗传。RFLP是较早应用于植物基因标记的一项分子标记技术。 
    B、RAPD，RAPD技术是基于聚合酶链式反应原理，通过运用不同核苷酸序列的随机引物（通常为10个碱基）对基因组DNA进行扩增，对扩增产物进行电泳寻找多态性标记。这类标记通常也是显性遗传，由于它在技术上非常简单，也无需对基因组序列有多少了解，只要合成一套随机引物就可用于作物物种，因而应用最为广泛。RAPD技术最大的缺点是稳定性差，易受不同药品的影响。为了提高该标记的稳定性和重复性，有必要将RAPD技术转化为特异序列扩增的SCAR(Sequence characterized amplified region )标记。即将RAPD作为初步筛选鉴定的一种方法，一旦发现所需的DNA扩增产物之后，再用特异序列扩增的方法，将RAPD转变成经典的PCR方法。 
    C、FISH，这是一项利用标记的DNA探针与染色体上的DNA杂交，在染色体上直接进行检测的分子标记技术。该项技术在研究内容，研究方法上将传统的细胞遗传学与现代分子遗传学结合起来，形成一门新的交叉学科――分子细胞遗传学。制作良好的染色体分裂相片子是该技术的关键。其最大优点是利用普通的显微镜，可以直接鉴定到所要研究的基因在染色体上的位置和分布。
    总之，形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记是检测外源基因重要的遗传标记形式。形态标记检测方法简便易行，提供直接的结果，但标记数少、多态性差、易受环境条件影响。 •细胞标记检测是最经典的方法，但工作量大，费人才。生化标记检测设备简单，试剂价格低廉，但标记数目有限。分子标记检测结果可靠，但仪器、试剂都较昂贵，其利用受到一定的限制。各种遗传标记形式都有其局限性，在检测外源基因时，可根据研究条件、研究目的及研究对象，合理地选择相应的检测方法。在实际应用中，常常将几种标记结合起来使用，其结果相互印证，提高了检测结果的准确性和可靠性。

  • 第2题：

    试述外源基因表达产物的检测方法。


    正确答案: （一）特异性mRNA的检测
    Northern杂交，即RNA-DNA杂交分析，是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。与Southern杂交类似，检测目的RNA的存在与否及含量。
    （二）报告基因的酶法检测
    （1）报告基因：其表达产物及其功能在未转化的植物细胞中并不存在；其表达产物便于检测。
    （2）目前动物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因，主要有：β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS基因）、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT基因）、胸苷激酶基因（cA）、二氢叶酸还原酶基因（DHFR）等。
    （三）免疫学检测
    （1）免疫沉淀法
    （2）酶联免疫吸附法（ELISA）
    ELISA是一种利用免疫学原理检测抗原、抗体的技术。它与经典的以同位素标记为基础的液－液抗原－抗体反应体系不同之处是建立了固－液抗原－抗体反应体系，并采用酶标记。抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。酶标抗原或抗体与相应抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，可以催化底物的水解、氧化或还原，从而产生有色物质。颜色反应的深浅与相应抗体或抗原量相关。
    （3）Western印迹法
    （4）固相放射免疫（RIA）法
    RIA法是一种定量测定外源表达蛋白的方法。该法具有很高的灵敏度，可检测出1pg的靶蛋白。
    （四）表达产物的生物学活性检测
    当外源基因的表达产物是一种酶蛋白时，可根据酶的催化反应来确定外源基因的表达与否和表达的程度。常见的有：淀粉酶、碱性磷酸酶、脂肪酶等。

  • 第3题：

    利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是（）。

    • A、基因灭活治疗
    • B、基因矫正治疗
    • C、基因置换治疗
    • D、基因添加治疗
    • E、自杀基因治疗

    正确答案:E

  • 第4题：

    利用基因动物作为外源基因的表达系统与体外细胞表达系统相比有什么优点？


    正确答案: 在体外细胞表达系统中基因产物的产量通常较低，特别是跨膜蛋白，因为它在转染细胞的膜上积累，从而妨碍蛋白的进一步积累，而在乳液分泌中，乳腺细胞中合成的脂被质膜包在囊内，然后一起以球状颗粒的形式分泌到乳液中。利用这一原理，蛋白质的产量提高，而且浓缩纯化也更加容易。

  • 第5题：

    下列关于基因检测疾病的叙述，错误的是（）

    • A、可以用测定基因表达产物——蛋白质的方法达到基因检测的目的
    • B、生物芯片的广泛使用，使基因及其表达产物的检测更加快速简便
    • C、基因检测疾病带来的负面影响主要是基因歧视
    • D、基因检测疾病时，一次只能检测一种疾病，十分麻烦

    正确答案:D

  • 第6题：

    利用外源基因表达代谢酶，催化药物前体转化为细胞毒性产物，导致宿主细胞死亡的基因治疗方法是（）。

    • A、基因活化
    • B、基因灭活
    • C、自杀基因导入治疗
    • D、基因协同致死
    • E、基因增补

    正确答案:C

  • 第7题：

    经过转化的重组体，需要对其进行鉴定，以检验它们在生长发育、传种接代过程中是否保留了已获得的外源基因，下列哪种方法属间接检测方法？（）

    • A、基因探针检测方法
    • B、分子杂交检测方法
    • C、外源基因检测技术
    • D、报告基因检测技术

    正确答案:D

  • 第8题：

    单选题
    克隆基因的大肠杆菌表达体系（　　）。
    A

    能表达外源基因的基因组DNA

    B

    只能表达外源基因的cDNA

    C

    能进行转录后加工

    D

    能进行翻译后加工

    E

    表达产物一般是可溶性的包涵体


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    单选题
    经过转化的重组体，需要对其进行鉴定，以检验它们在生长发育、传种接代过程中是否保留了已获得的外源基因，下列哪种方法属间接检测方法？（）
    A

    基因探针检测方法

    B

    分子杂交检测方法

    C

    外源基因检测技术

    D

    报告基因检测技术


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    填空题
    外源基因表达的检测方法有三种（）（）（）

    正确答案： 生化反应检测法,免疫学检测法,生物学活性的检测
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    单选题
    转基因技术中外源基因表达产物检测不适宜的方法有（）。
    A

    特异性mRNA的检测

    B

    报告基因的酶法检测

    C

    酶联免疫吸附法（ELISA）

    D

    Southern印迹法


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    简述使外源基因在宿主细胞中顺利表达的两种方法

    正确答案： （1）在形成重组DNA分子时，在载体的启动基因顺序和核糖体结合顺序后面的适当位置上连接外源基因。
    （2）将外源基因插入到载体的结构基因中的适当位置上，转录和翻译的结果将产生一个融合蛋白。这种蛋白质被提纯后，要准确地将两部分分开，才能获得所需的蛋白质
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    转基因技术中外源基因表达产物检测不适宜的方法有（）。

    • A、特异性mRNA的检测
    • B、报告基因的酶法检测
    • C、酶联免疫吸附法（ELISA）
    • D、Southern印迹法

    正确答案:D

  • 第14题：

    在大肠杆菌中，外源基因表达产物的主要形式为（）和（）。


    正确答案:可溶性蛋白；不溶性蛋白

  • 第15题：

    下列关于基因检测疾病的叙述不正确的是（）

    • A、可以用测定基因表达产物—蛋白质的方法达到基因检测的目的
    • B、生物芯片的广泛使用，使基因及其表达产物的检测更加快速简便
    • C、基因检测疾病带来的负面影响主要是基因歧视
    • D、基因检测疾病时，一次只能检测一种疾病，十分麻烦

    正确答案:D

  • 第16题：

    简述使外源基因在宿主细胞中顺利表达的两种方法


    正确答案: （1）在形成重组DNA分子时，在载体的启动基因顺序和核糖体结合顺序后面的适当位置上连接外源基因。
    （2）将外源基因插入到载体的结构基因中的适当位置上，转录和翻译的结果将产生一个融合蛋白。这种蛋白质被提纯后，要准确地将两部分分开，才能获得所需的蛋白质

  • 第17题：

    克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因）（）

    • A、I+II
    • B、I+III
    • C、II+III
    • D、I+II+III

    正确答案:D

  • 第18题：

    间接基因诊断途径是（）。

    • A、检测基因表达产物
    • B、检测相邻基因
    • C、检测连锁的遗传标记
    • D、直接检测突变的基因
    • E、检测外源基因

    正确答案:C

  • 第19题：

    RNA干扰技术是用（）来干扰相关基因的表达，让基因（）。

    • A、一段内源RNA；转录表达
    • B、一段外源RNA；沉默
    • C、一段外源DNA；转录表达
    • D、一段外源RNA；与RNA结合

    正确答案:B

  • 第20题：

    问答题
    转基因生物的外源基因检测方法有哪些？

    正确答案： （1）形态标记。形态标记是指在杂种后代中那些可被直接观察到的性状，如植株的茎、叶、穗、籽粒各部分大小、色泽、形状及抗病性表现等。这是检测外源基因最常用的、也是最直观的方法。一般是参照双亲的特征，根据杂咱后代的表现情况，来确定杂种后代中是否有外源基因导入。
    （2）细胞标记。细胞标记，即细胞学鉴定。通过对染色体的数目和形态特征观察、染色体带型和核型分析以及减数分裂染色体配对行为的观察，来检测外源基因。这是检测外源基因最基本、最经典的方法。
    具体包括：
    A.杂种细胞学，观察通过对杂种体细胞染色体观察，统计其染色体数目，并结合花粉母细胞减数分裂中期染色体配对行为观察，来确是否有外源基因导入。通过染色体计数和配对行为观察，很容易确定双二倍体、部分双二倍体、附加系、单体、缺体、端体等染色体的数目和类型。利用有无随体染色体，也可鉴定外源基因。
    B.核型及核型分析，核型通常是指体细胞染色体所有可测定的表型特证的总称。核型分析就是对核型的各种特征进行定量或定性的表达。核型分析的染色体，一般以体细胞分裂中期的染色体作为基本形态。在核型分析的表述格式中，一般包括染色体数目和染色体形态特征，形态特征主要包括相对长度、臂比、着丝点位置和随体的有无。染色体的分类目前采用应用最广泛的两点四区系统，我国于1984年第一届全国植物染色体学术讨论会上稍加修改后推行。根据臂比值将染色体分为正中部着丝点（M）、中部着丝点区（m）、近中部着丝点区（sm）、近端部着丝点区（st）、端部着丝点区（t）和端着丝点（T）即所谓的两点四区。
    C.染色体分带，染色体分带技术是通过一定的碱、酸、盐、温度等因素对染色体进行处理，借助Giemsa等染料染色，使染色体在一定部位呈现深浅程度不同的染色区段而形成特定的带纹，由于其带纹在各染色体上显示的位置、宽窄、大小、数目、浓淡等具有相对的稳定性，故可用来进行染色体的鉴别和分析。
    （3）生化标记。生化标记是利用电泳等技术对生物大分子，如蛋白质、酶等进行鉴定。因为蛋白质是由基因编码的，特定的基因型决定了蛋白质的特定组成，因此，不同种、属所特有的蛋白质组成能够反映出该种、属的基因型。
    具体包括：
    A、贮藏蛋白分析法，按其溶解特性可分成谷蛋白和醇溶蛋白两大类，其蛋白的亚基存在着丰富的变异类型，不受环境条件影响而能稳定遗传。
    B、同工酶分析法，同工酶是结构不同但功能相同的一类酶。在一定条件下电泳染色，同一遗传材料可同时显示几条酶带，而不同的遗传材料可具有不同的酶带。同工酶是基因的直接产物，是基因表达的结果。
    （4）分子标记。分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记之后的一种新的分子遗传标记方法，它是以DNA多态性与性状间的紧密连锁关系为基础的遗传标记，能够稳定遗传，且遗传方式比较简单，是性状基因的真实反映，能在不同发育阶段对不同组织DNA进行检测分析。目前，用于检测小麦外源基因的分子标记主要有限制性片段长度多态性（restriction fragment length length polymorphism 简称 RFLP）、随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA 简称 RAPD ）和基因组原位杂交（genomic in situ hybridization 简称 GISH）。这项新技术越来越受到重视，特别是在检测外源小片断染色时更是倍受青睐。 
    具体包括：
    A、RFLP，RFLP技术是基于不同物种、不同材料间基因组DNA的限制性内切酶识别位不同的原理，通过对基因组DNA经特定的限制性内切酶消化，产生不同大小的DNA片断，经电泳后转移到固定支撑物上，用特定的放射性标记的DNA片断（探针）杂交检测多态性。它是检测不同物种个体间基因细微差异的可靠手段，标记的数量较大，呈简单的孟德尔显性遗传。RFLP是较早应用于植物基因标记的一项分子标记技术。 
    B、RAPD，RAPD技术是基于聚合酶链式反应原理，通过运用不同核苷酸序列的随机引物（通常为10个碱基）对基因组DNA进行扩增，对扩增产物进行电泳寻找多态性标记。这类标记通常也是显性遗传，由于它在技术上非常简单，也无需对基因组序列有多少了解，只要合成一套随机引物就可用于作物物种，因而应用最为广泛。RAPD技术最大的缺点是稳定性差，易受不同药品的影响。为了提高该标记的稳定性和重复性，有必要将RAPD技术转化为特异序列扩增的SCAR(Sequence characterized amplified region )标记。即将RAPD作为初步筛选鉴定的一种方法，一旦发现所需的DNA扩增产物之后，再用特异序列扩增的方法，将RAPD转变成经典的PCR方法。 
    C、FISH，这是一项利用标记的DNA探针与染色体上的DNA杂交，在染色体上直接进行检测的分子标记技术。该项技术在研究内容，研究方法上将传统的细胞遗传学与现代分子遗传学结合起来，形成一门新的交叉学科――分子细胞遗传学。制作良好的染色体分裂相片子是该技术的关键。其最大优点是利用普通的显微镜，可以直接鉴定到所要研究的基因在染色体上的位置和分布。
    总之，形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记是检测外源基因重要的遗传标记形式。形态标记检测方法简便易行，提供直接的结果，但标记数少、多态性差、易受环境条件影响。 •细胞标记检测是最经典的方法，但工作量大，费人才。生化标记检测设备简单，试剂价格低廉，但标记数目有限。分子标记检测结果可靠，但仪器、试剂都较昂贵，其利用受到一定的限制。各种遗传标记形式都有其局限性，在检测外源基因时，可根据研究条件、研究目的及研究对象，合理地选择相应的检测方法。在实际应用中，常常将几种标记结合起来使用，其结果相互印证，提高了检测结果的准确性和可靠性。
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    问答题
    试述外源基因表达产物的检测方法。

    正确答案： （一）特异性mRNA的检测
    Northern杂交，即RNA-DNA杂交分析，是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。与Southern杂交类似，检测目的RNA的存在与否及含量。
    （二）报告基因的酶法检测
    （1）报告基因：其表达产物及其功能在未转化的植物细胞中并不存在；其表达产物便于检测。
    （2）目前动物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因，主要有：β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS基因）、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT基因）、胸苷激酶基因（cA）、二氢叶酸还原酶基因（DHFR）等。
    （三）免疫学检测
    （1）免疫沉淀法
    （2）酶联免疫吸附法（ELISA）
    ELISA是一种利用免疫学原理检测抗原、抗体的技术。它与经典的以同位素标记为基础的液－液抗原－抗体反应体系不同之处是建立了固－液抗原－抗体反应体系，并采用酶标记。抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。酶标抗原或抗体与相应抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，可以催化底物的水解、氧化或还原，从而产生有色物质。颜色反应的深浅与相应抗体或抗原量相关。
    （3）Western印迹法
    （4）固相放射免疫（RIA）法
    RIA法是一种定量测定外源表达蛋白的方法。该法具有很高的灵敏度，可检测出1pg的靶蛋白。
    （四）表达产物的生物学活性检测
    当外源基因的表达产物是一种酶蛋白时，可根据酶的催化反应来确定外源基因的表达与否和表达的程度。常见的有：淀粉酶、碱性磷酸酶、脂肪酶等。
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    填空题
    在大肠杆菌中，外源基因表达产物的主要形式为（）和（）。

    正确答案： 可溶性蛋白,不溶性蛋白
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    单选题
    利用外源基因表达代谢酶，催化药物前体转化为细胞毒性产物，导致宿主细胞死亡的基因治疗方法是（）。
    A

    基因活化

    B

    基因灭活

    C

    自杀基因导入治疗

    D

    基因协同致死

    E

    基因增补


    正确答案： D
    解析： 暂无解析

  • 第24题：

    单选题
    间接基因诊断途径是（）。
    A

    检测基因表达产物

    B

    检测相邻基因

    C

    检测连锁的遗传标记

    D

    直接检测突变的基因

    E

    检测外源基因


    正确答案： E
    解析： 暂无解析

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