固定化酶的常用方法有哪些？

题目

固定化酶的常用方法有哪些？

相似考题

1.酶和细胞固定化最常用有效的方法是什么?

2.简述酶和细胞的固定化方法有哪些？各有哪些特点？

3.共价结合制备固定化酶的方法有哪些？

4.简述固定化酶有哪些优点？

参考答案和解析
正确答案: 固定化酶的常用方法有：
㈠载体结合法是将酶结合到不溶性载体上的一种固定方法，根据结合形式的不同可以分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法；
㈡交联法是用双功能或多功能试剂使酶与酶或微生物的细胞与细胞之间交联的固定化方法；
㈢包埋法可分为网格型和微囊型。
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  • 第1题：

    固定化酶反应器有哪些？


    正确答案: （1）搅拌罐型反应器；
    （2）固定床型反应器；
    （3）流化床型反应器；
    （4）膜型反应器；
    （5）鼓泡塔型反应器。

  • 第2题：

    酶的固定化方法有哪些？


    正确答案: A.吸附法
    （1）物理吸附法；
    （2）离子吸附法；
    B.化学结合法
    （1）共价结合法；
    （2）共价交联法；
    C.包埋法
    （1）凝胶网格型；
    （2）微囊型。

  • 第3题：

    何谓固定化酶？经过固定化以后，酶的特性有哪些改变？


    正确答案:固定化酶：固定在载体上，并在一定空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。改变有：稳定性：固相酶的稳定性比游离酶高，
    主要表现在：（1）热稳定性：固定化酶热稳定性较之天然酶提高。（2）对蛋白酶水解作用稳定性：固相酶比天然酶有更强的抵抗蛋白酶水解作用的能力。（3）对变性试剂作用的稳定性：固相酶对各种蛋白变性剂的稳定性，一般都比天然酶强。（4）保藏稳定性：固相酶比天然酶保存的时间更长。
    最适温度：（1）固相酶的最适温度一般比天然酶高，个别会有所降低（2）同种酶，采用不同的方法或不同载体固定化后，其最适温度可能不同
    最适pH：酶经固定化后，其作用的最适pH常会发生偏移影响固定化酶最适PH的因素主要有两个。（1）载体性质对最适pH影响：用带负电荷载体制备的固定化酶，最适pH比游离酶最适pH高。用带正电荷载体制备的固定化酶，最适pH比游离酶最适pH低。用不带电荷载体制备的固定化酶，最适pH一般不改变。（2）产物性质对最适pH影响；若酶催化反应产物为酸性时，固定化酶最适pH比游离酶的最适pH要高。若酶催化反应产物为碱性时，固定化酶最适pH比游离酶的最适PH要低。若酶催化反应产物为中性时，固定化酶最适pH不变。
    底物特异性：固定化酶底物特异性与游离酶相比，有一定变化，一般为：作用于小分子底物的酶类经固定化后，专一性基本不变。而既可作用大分子也可作用小分子底物的酶类经固定化后专一性会发生变化。

  • 第4题：

    通常酶的固定化方法有（）。酶分子的体外改造包括酶的（）。


    正确答案:吸附法共价键结合法交联法包埋法；表面修饰内部修饰

  • 第5题：

    酶的固定化方法有（）、（）、（）、（）。


    正确答案:吸附法；包埋法；共价键结合法；交联法

  • 第6题：

    制备固定化酶的方法有哪些？


    正确答案: 制备固定化酶就是将酶固定在不溶解的膜状或颗粒状聚合物上。具体方法有载体结合法，交联法和包埋法。这些方法也可以并用，称为混合法。其中载体结合法还包括共价结合法，离子结合法，物理吸附法。包埋法还包括格子型和微胶囊型。

  • 第7题：

    固定化酶有哪些特点？


    正确答案: 固定化酶4游离酶相比，具有如下特点：
    ①极易将固定化酶与底物、产物分开，产物溶液中没有酶的残留.提纯工艺简化。
    ⑦能够在较长时间内进行反应（分批反应和连续反应）、便于实现连续化和自动化。
    ⑦大多数情况下，能够提高酶的稳定性。
    ④酶反应过程能够进行严格控制。
    ⑤酶的利用率提高，生产成本降低。
    ⑥能够进行多酶反应。
    ⑦可以增加产物的收率，提高产物的质量。
    ⑧增加生产的成本。
    ⑨只能用于可溶性小分子底物，对大分子的底物适应性差，不适宜于多酶反应，特别是需要辅因子的反应等。

  • 第8题：

    选择固定化酶制备方法应遵循哪些原则？


    正确答案: ①必须注意维持酶的催化活性及专一性。
    ②固定化酶应该有利于生产自动化、连续化。
    ③固定化酶应有最小的空间位阻，尽可能不妨碍酶与底物的接近，以提高产品的产量。
    ④酶与载体必须结合牢固，从而使固定化酶能回收贮藏，便于反复使用。
    ⑤固定化酶应有最大的稳定性，所选载体不应与产物或反应液发生化学反应。
    ⑥固定化酶成本要低，以利于工业使用。

  • 第9题：

    问答题
    与固定化酶相比，固定化细胞有哪些的优点？

    正确答案： 免去了破碎细胞提取酶的手续；酶在细胞内的稳定性较高，完整细胞固定化后酶活性损失少；固定化细胞制备的成本比固定化酶低；无需辅酶再生。
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    问答题
    制备固定化酶的方法有哪些？

    正确答案： 制备固定化酶就是将酶固定在不溶解的膜状或颗粒状聚合物上。具体方法有载体结合法，交联法和包埋法。这些方法也可以并用，称为混合法。其中载体结合法还包括共价结合法，离子结合法，物理吸附法。包埋法还包括格子型和微胶囊型。
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    问答题
    简述酶和细胞的固定化方法有哪些？各有哪些特点？

    正确答案： （1）载体结合法：是将酶结合于不溶性载体上的一种固定化方法。可分为物理吸附法，离子结合法，共价结合法。
    物理吸附法：优点在于操作简单，可选用不同的吸附剂，酶失活后载体仍可再生。缺点在于最适吸附酶量无规律可循，酶与载体之间的吸附剂不强，酶易于脱落。
    离子结合法：操作简单，处理条件温和，酶的活性中心不易被破坏。但是酶和载体的结合力比较弱，会发生酶脱落的现象。
    共价结合法：酶和载体的结合力牢固，不会发生酶脱落。但反应条件苛刻，操作复杂，酶的活性中心会遭到部分破坏。
    （2）交联法：优点是交联后的酶活性较高，缺点是反应条件剧烈，酶的回收率低。
    （3）包埋法：不需要改变酶的高级结构，酶的回收率较高。但包埋酶会导致酶的失活，包埋法只适合作用于小分子底物和产物的酶，对于那些作用于大分子底物和产物的酶是不合适的。
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    共价结合制备固定化酶的方法有哪些？

    正确答案： 重氮化、迭氮化、酸酐活化法、异硫氰酸酯法、双功能试剂臣应、澳化氰活化法、硫交换法、醛胺缩合法、四元缩合法、金属整合法、醚氯反应、异氰酸反应、烷基化反应及硅烷化反应等。
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    酶的固定化方法主要有哪些？作简单阐述


    正确答案: 将酶用物理或化学的方法固定在不溶于水的载体上，形成一种可以重复使用的酶，叫固定化酶。制备固定化酶的方法很多，有包埋法，吸附法，共价键结合法，以及交联法等
    1.包埋法：将聚合物的单体与酶溶液混合，再借助于聚合助进剂作用进行聚合，酶被包埋在聚合物中以达到固定化。操作简单，可制得较高活力的固定化酶。
    2.吸附法：利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面而使酶固定化的方法。常用的吸附剂有活性炭，氧化铝，硅藻土，多孔陶瓷，多孔玻璃，硅胶，羧基磷灰石等.操作简便，条件温和，不会引起酶的变性失活，载体价廉易得，可反复使用。但酶与载体结合不太牢固易脱落
    3.共价键结合法：酶蛋白侧链基团和载体表面上的功能基团之间形成共价键而固定的方法。酶与载体牢固，制得的固定化酶稳定性好。但制备过程中反应条件较为强烈，难以控制，易使酶变性失活，且制作手续繁琐。
    4.交联法：利用双功能或多功能试剂在酶分子间或酶与载体间、或酶与惰性蛋白间进行交联反应以制得固定化酶的方法。常用的试剂有戊二醛，己二胺，顺丁烯二酸酐，双偶氮苯等。其中应用最广泛的是戊二醛。制备的固定化酶结合牢固，可长时使用.但由于交联反应较激烈，酶分子的多个基团被交联，酶活力损失较大。

  • 第14题：

    酶的固定化方法有哪些？各自的优缺点是什么？


    正确答案:方法有：吸附法、共价结合法、交联法。
    吸附法优点：操作简便，条件温和，吸附剂可反复使用。
    缺点：酶和载体吸附力较弱，易解吸脱落；
    共价结合法优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。
    缺点：反应条件较激烈，易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。
    交联法优点：操作简便，结合牢固，可长时间使用。
    缺点：交联反应条件较激烈，酶分子的多个基团被交联，致使酶活力损失较大，且制成的固定化酶颗粒较小，机械强度也较低。

  • 第15题：

    评价固定化酶固定效果的参数有哪些？


    正确答案:由于选用的固定化方法不同，固定化酶的活力和性质也有所不同，因此需要对不同的固定化方法进行评价。评价的指标主要有：
    （1）固定化酶的比活
    每克（毫克）干固定化酶所具有的酶活力单位。或：单位面积（cm2）的酶活力单位表示（酶膜、酶管、酶板）。
    （2）操作半衰期
    是衡量稳定性的指标。指在连续使用的条件下，固定化酶活力下降为最初活力一半所需要的时间（t1/2）。固定化酶的操作半衰期是影响其实际应用的重要因素。
    （3）偶联效率＝（加入的蛋白量－溶液中残留的蛋白量）/加入的总蛋白量×100％
    （4）活力回收＝（固定化酶活力/投入的总酶活力）×100％
    （5）相对酶活力具有相同酶蛋白量的固定化酶活力与游离酶活力的比值。
    （6）酶载量单位载体所固定的酶活力（或酶蛋白量）。
    （7）酶的固定化效率与酶的活力回收率；酶的固定化效率：是指酶与载体结合的百分率。酶活力回收率：指固化酶的总活力与用于固化酶的总酶活力的百分率。

  • 第16题：

    论述常用的固定化方法主要有哪些？它们都有哪些优缺点？


    正确答案: 常用的细胞固定化的方法主要有吸附、共价贴附、离子/共价交联、包埋和微囊化。
    ㈠吸附：
    定义：是指用固体吸附剂将细胞吸附在其表面而使细胞固定化的方法。
    优点：操作简便、条件温和，是动物细胞固定化中最早研究使用的方法。
    缺点：载体的负荷能力低，细胞容易脱落，由于细胞吸附于支持物表面，因此容易受到机械剪切力的作用。
    ㈡共价贴附
    定义：利用共价键将动物细胞与结合的固定化方法
    优点：此法可减少细胞的泄露，
    缺点：须引入化学试剂，对细胞活性有影响，且因贴附而导致扩散限制小，细胞得不到保护。
    ㈢离子/共价交联法
    定义：如果对细胞用交联剂处理，则在细胞之间形成交联桥，使之絮结。
    缺点：交联试剂会使一些细胞死亡，也会产生扩散限制。
    ㈣包埋法
    定义：将细胞包埋在多孔载体内部制成固定化细胞的方法。
    优点：步骤简单，条件温和，负荷量大，细胞泄露少，抗机械剪切。
    缺点：扩散限制，并非所有细胞都处于最佳基质浓度，且大分子机制不能渗透到高聚物网格内部。一般适用于非贴壁依赖性细胞的固定化。
    ㈤微囊法
    是用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微囊里，细胞不能逸出，但小分子物质及营养物质可自由出入半透膜；囊内是种微小培养环境，与液体培养相似，能保护细胞少受损伤，故细胞生长好，密度高。

  • 第17题：

    酶的固定化的方法有（）、（）、（）、（）


    正确答案:吸附法；包埋法；结合法；交联法

  • 第18题：

    固定化酶制备的方法有（）、（）、（）、（）


    正确答案:包埋法；吸附法；共价偶联法；非共价结合法

  • 第19题：

    制备固定化酶常用的方法有哪些？各有何优缺点？


    正确答案: （一）包埋法：将酶分子包埋在凝胶的网眼中或乍透性的聚合物膜腔中，以达到固定化酶的方法叫包埋法。
    包埋法一般不需要与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率较高，但是在包埋时发生化学聚合反应，酶容易失活包埋法只适合作用于小分子底物和产物的酶，对于那些作用于大分子底物和产物的两是不适合的。
    （二）吸附法：物理吸附：酶活力损失少，与载体相互作用力弱，易脱落。
    离子吸附：操作简单，条件温和，酶活回收率高；易受缓冲液的影响。在离子强度高的溶液中易脱落。
    （三）共价偶联法：载体与酶以共价键结合的固定化方法，不易脱落，连续使用时间长；操作复杂，酶活回收率不高；影响底物专一性，影响催化活性。
    （四）非共价结合法：结晶法：酶浓度高，对于活力低的酶更具有优越性。分散法：对酶进行分离再利用。

  • 第20题：

    酶基因克隆有哪些常用的方法？


    正确答案:（1）根据已知序列来扩增目的基因
    （2）根据已知探针从基因文库中钓取目的基因
    （3）未知序列基因的打靶

  • 第21题：

    问答题
    为什么要固定化酶？酶固定化的优缺点有哪些？

    正确答案： 酶的固定化是指将酶与不溶性载体结合，使游离酶、细胞或细胞器等的催化活动完全或基本上限制在一定空间内的过程，经过固定化的酶，容易与溶液中的底物和产物分离，且可使酶反复使用，效率高，生产成本大大下降，并增强了其稳定性。因此，固定化酶在工业生产上的应用为生产自动化、管道化、连续化提供了条件，促进了酶工程的飞跃发展。
    固定化酶优点：
    （1）同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次、长期地使用；并可预测衰变的速度；
    （2）固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时纯化简单；
    （3）稳定性显著提高，包括热稳定性、对蛋白质的稳定性（提高了对蛋白质酶、蛋白质变性剂和抑制剂的抵抗作用）、操作稳定性和储藏稳定性；（4种稳定性）
    （4）便于控制其形状以适应不同用途，如颗粒、线条、薄膜和酶管等；
    （5）提高了产物质量，应用范围广；
    （6）提供了研究酶动力学的良好模型。
    缺点：
    （1）一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的。
    （2）固定化酶一般只适用于水溶性的小分子底物；大分子底物常受载体阻拦，不易接触酶，致使催化活力难以发挥。
    （3）首次使用时投入成本较高。
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    问答题
    何谓固定化酶？经过固定化以后，酶的特性有哪些改变？

    正确答案： 固定化酶：固定在载体上，并在一定空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。
    改变有：稳定性：固相酶的稳定性比游离酶高，主要表现在：
    （1）热稳定性：固定化酶热稳定性较之天然酶提高。
    （2）对蛋白酶水解作用稳定性：固相酶比天然酶有更强的抵抗蛋白酶水解作用的能力。
    （3）对变性试剂作用的稳定性：固相酶对各种蛋白变性剂的稳定性，一般都比天然酶强。
    （4）保藏稳定性：固相酶比天然酶保存的时间更长。
    最适温度：
    （1）固相酶的最适温度一般比天然酶高，个别会有所降低
    （2）同种酶，采用不同的方法或不同载体固定化后，其最适温度可能不同
    最适pH：酶经固定化后，其作用的最适pH常会发生偏移影响固定化酶最适PH的因素主要有两个。
    （1）载体性质对最适pH影响：用带负电荷载体制备的固定化酶，最适pH比游离酶最适pH高。用带正电荷载体制备的固定化酶，最适pH比游离酶最适pH低。用不带电荷载体制备的固定化酶，最适pH一般不改变。
    （2）产物性质对最适pH影响；若酶催化反应产物为酸性时，固定化酶最适pH比游离酶的最适pH要高。若酶催化反应产物为碱性时，固定化酶最适pH比游离酶的最适PH要低。若酶催化反应产物为中性时，固定化酶最适pH不变。
    底物特异性：固定化酶底物特异性与游离酶相比，有一定变化，一般为：作用于小分子底物的酶类经固定化后，专一性基本不变。而既可作用大分子也可作用小分子底物的酶类经固定化后专一性会发生变化。
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    问答题
    制备固定化酶常用的方法有哪些？各有何优缺点？

    正确答案： （一）包埋法：将酶分子包埋在凝胶的网眼中或乍透性的聚合物膜腔中，以达到固定化酶的方法叫包埋法。
    包埋法一般不需要与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率较高，但是在包埋时发生化学聚合反应，酶容易失活包埋法只适合作用于小分子底物和产物的酶，对于那些作用于大分子底物和产物的两是不适合的。
    （二）吸附法：物理吸附：酶活力损失少，与载体相互作用力弱，易脱落。
    离子吸附：操作简单，条件温和，酶活回收率高；易受缓冲液的影响。在离子强度高的溶液中易脱落。
    （三）共价偶联法：载体与酶以共价键结合的固定化方法，不易脱落，连续使用时间长；操作复杂，酶活回收率不高；影响底物专一性，影响催化活性。
    （四）非共价结合法：结晶法：酶浓度高，对于活力低的酶更具有优越性。分散法：对酶进行分离再利用。
    解析： 暂无解析

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