简述基因工程菌的构建过程？

题目

简述基因工程菌的构建过程？

相似考题

1.基因工程菌的培养方式主要有();();();()和();

2.基因工程菌的构建包括（）、（）、（）三个主要环节。

3.简述构建基因工程菌的一般过程。

4.简述基因组文库构建的基本操作？

参考答案和解析
正确答案:1.目的基因的获取
获取目的基因是实施基因工程的第一步。
目的基因的获取方法主要有两种：
①从自然界中已有的物种中分离出来
②用人工的方法合成。
2.PCR技术扩增目的基因
3. 基因表达载体的构建
基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因
4.将目的基因导入受体细胞
5.目的基因的监测与鉴定
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  • 第1题：

    什么是基因工程菌，工程菌构建的基本过程和各阶段的主要任务是什么，所涉及基因工程原理是什么？ 


    正确答案: 将目的基因导入细菌体内使其表达，产生所需要的蛋白的细菌称为基因工程菌。
    工程菌构建的基本过程如下：目标基因克隆（PCR、文库筛选、化学合成）→表达载体构建（酶切、链接）→遗传转化与筛选（外源基因导入与培养）→工程菌（获得新形状、功能、产生物质）
    酶切：在特异位点上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性片段。（DNA+缓冲液+限制性内切酶；37℃，1小时；加热、加EDTA终止；电泳检查酶切完整性）
    链接：DNA双链上相邻的3’羟基和5’磷酸基团共价结合形成3’-5’磷酸二酯键，使原来断开的DNA缺口重新连接起来。（载体片段和基因片段，缓冲液，连接酶；16-26℃，数小时；70℃加热10min终止反应）
    转化：把外源基因导入宿主细胞的过程。（氯化钙法向大肠杆菌导入外源基因）

  • 第2题：

    基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定性的现象，质粒不稳定分为（）和（）；基因工程菌的不稳定性至少维持（）代以上。


    正确答案:分裂不稳定性；结构不稳定性；25

  • 第3题：

    关于菌种的选育正确的是（）

    • A、自然选育的菌种不经过人工处理
    • B、诱变育种原理的基础是基因突变
    • C、通过有性杂交可形成工程细胞
    • D、采用基因工程的方法可构建工程菌

    正确答案:A,B,D

  • 第4题：

    如何对基因工程菌发酵车间进行防护？


    正确答案:接种、机械密封、取样、排气、排液。

  • 第5题：

    基因工程菌


    正确答案:是指以微生物为操作对象，通过基因工程技术获得的表达外源基因或过量表达或抑制表达自身基因的工程生物，包括细菌、放线菌等原核细胞微生物和酵母、丝状真菌等真核细胞微生物。有时也把基因工程茵称为重组菌。

  • 第6题：

    何谓基因工程？阐述基因工程的基本操作过程。在一利用pBR322质粒和BamHⅠ构建“工程菌”的实验中，如何筛选含有目的基因的宿主细菌？


    正确答案: 基因工程是指人们利用分子生物学的理论和技术，自觉设计操纵改造和重建细胞的遗传核心——基因组，从而使生物体的遗传性状发生定向变异，以最大限度地满足人类活动的需要。基因工程的基本操作包括目的基因的取得，载体系统的选择，目的基因与载体重组体的构建，重组载体导入受体细胞，工程菌株的表达和检测等。
    大肠杆菌的pBR322质粒上有两个抗药性标记，即氨苄青霉素抗性和四环素抗性标记，限制酶BamHⅠ在该质粒上的插入点在四环素抗性基因上，当外源DNA片段插入后会引起四环素抗性基因失活。制备四环素平板、氨苄青霉素平板，将已转化的宿主细胞涂布，若在四环素平板上不能生长，在氨苄青霉素平板上能生长，则证明该菌已含有目的基因；若在两种平板上都能生长，则该菌不含目的基因。

  • 第7题：

    问答题
    简述构建基因工程菌的一般过程。

    正确答案： 1、目的基因的获取
    2、PCR技术扩增目的基因
    3、基因表达载体的构建
    4、将目的基因导入受体细胞
    5、目的基因的检测与鉴定
    解析： 暂无解析

  • 第8题：

    问答题
    什么是基因重组？构建基因工程菌的一般流程是什么？

    正确答案： 根据人们预先设想，利用酶学的方法，将目的基因重组到一个适宜的载体上，组成重组子，将重组子转化到适当受体细胞中进行扩增表达，以达到改造生物细胞目的的技术。
    流程：
    目的基因片段的产生和分离；
    目的基因片段共价连接到载体上，即体外重组；
    体外重组的杂合分子转入合适的宿主；筛选和检测。
    解析： 暂无解析

  • 第9题：

    单选题
    关于菌种的选育不正确的是（）
    A

    自然选育的菌种不经过人工处理

    B

    诱变育种原理的基础是基因突变

    C

    通过有性杂交可形成工程细胞

    D

    采用基因工程的方法可构建工程菌


    正确答案： A
    解析： 暂无解析

  • 第10题：

    名词解释题
    基因工程菌苗

    正确答案： 基因工程菌苗：主要是指用重组DNA技术研制的菌苗。
    解析： 暂无解析

  • 第11题：

    问答题
    简述基因工程药物无性繁殖系的构建过程。

    正确答案： 1）基因工程药物目的基因的制取；
    2）目的基因与克隆载体的体外重组；
    3）重组克隆载体引入宿主细胞的转化与传导；
    4）含目的基因重组体的筛选鉴定及分析；
    5）目的基因在宿主细胞中的高效表达。
    解析： 暂无解析

  • 第12题：

    问答题
    简述构建突变基因文库的主要过程。

    正确答案： 突变基因文库的主要过程：
    1）选择合适的载体（质粒、噬菌体、黏粒、噬菌粒）；
    2）基因重组（DNA连接酶连接突变基因和载体DNA）；
    3）组装突变基因文库（转入受体细胞或包装成有感染活性的重组噬菌体）。
    解析： 暂无解析

  • 第13题：

    基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。


    正确答案: 抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选或PCR筛选、差式筛选、DNA探针
    多数克隆载体均带有抗生素抗性基因（抗氨苄青霉素、四环素）。当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。但不能区分是否已重组。
    在含有两个抗性基因的载体中，如果外源DNA片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子。如pUC质粒含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。

  • 第14题：

    关于菌种的选育不正确的是（）

    • A、自然选育菌种费时且盲目性大
    • B、诱变育种原理的基础是基因突变
    • C、代谢控制育种方法有转化、转导及杂交
    • D、采用基因工程的方法可构建工程菌

    正确答案:C

  • 第15题：

    简述构建突变基因文库的主要过程。


    正确答案:突变基因文库的主要过程：
    1）选择合适的载体（质粒、噬菌体、黏粒、噬菌粒）；
    2）基因重组（DNA连接酶连接突变基因和载体DNA）；
    3）组装突变基因文库（转入受体细胞或包装成有感染活性的重组噬菌体）。

  • 第16题：

    什么是基因工程菌？基因工程菌应具备哪些条件？


    正确答案: 基因工程菌主要是指以微生物为操作对象，通过基因工程技术获得的表达外源基因或过量表达或抑制表达自身基因的工程生物，包括细菌、放线菌等原核细胞微生物和酵母、丝状真菌等真核细胞微生物。有时也把基因工程茵称为重组菌。
    条件：发酵产物是高浓度高转化率高产率的，同时是分泌型菌株；菌株能利用常用的碳源，并可以进行连续发酵；菌株不是致病株，也不产内毒素；代谢控制容易；能进行适当的DNA重组，并且稳定，重组的DNA不易脱落。基因工程菌主要是指以微生物为操作对象，通过基因工程技术获得的表达外源基因或过量表达或抑制表达自身基因的工程生物，包括细菌、放线菌等原核细胞微生物和酵母、丝状真菌等真核细胞微生物。有时也把基因工程茵称为重组菌。
    条件：发酵产物是高浓度高转化率高产率的，同时是分泌型菌株；菌株能利用常用的碳源，并可以进行连续发酵；菌株不是致病株，也不产内毒素；代谢控制容易；能进行适当的DNA重组，并且稳定，重组的DNA不易脱落。

  • 第17题：

    关于菌种的选育不正确的是（）

    • A、自然选育的菌种不经过人工处理
    • B、诱变育种原理的基础是基因突变
    • C、通过有性杂交可形成工程细胞
    • D、采用基因工程的方法可构建工程菌

    正确答案:C

  • 第18题：

    什么是基因重组？构建基因工程菌的一般流程是什么？


    正确答案:根据人们预先设想，利用酶学的方法，将目的基因重组到一个适宜的载体上，组成重组子，将重组子转化到适当受体细胞中进行扩增表达，以达到改造生物细胞目的的技术。
    流程：
    目的基因片段的产生和分离；
    目的基因片段共价连接到载体上，即体外重组；
    体外重组的杂合分子转入合适的宿主；筛选和检测。

  • 第19题：

    问答题
    什么是基因工程菌？基因工程菌应具备哪些条件？

    正确答案： 基因工程菌主要是指以微生物为操作对象，通过基因工程技术获得的表达外源基因或过量表达或抑制表达自身基因的工程生物，包括细菌、放线菌等原核细胞微生物和酵母、丝状真菌等真核细胞微生物。有时也把基因工程茵称为重组菌。
    条件：发酵产物是高浓度高转化率高产率的，同时是分泌型菌株；菌株能利用常用的碳源，并可以进行连续发酵；菌株不是致病株，也不产内毒素；代谢控制容易；能进行适当的DNA重组，并且稳定，重组的DNA不易脱落。基因工程菌主要是指以微生物为操作对象，通过基因工程技术获得的表达外源基因或过量表达或抑制表达自身基因的工程生物，包括细菌、放线菌等原核细胞微生物和酵母、丝状真菌等真核细胞微生物。有时也把基因工程茵称为重组菌。
    条件：发酵产物是高浓度高转化率高产率的，同时是分泌型菌株；菌株能利用常用的碳源，并可以进行连续发酵；菌株不是致病株，也不产内毒素；代谢控制容易；能进行适当的DNA重组，并且稳定，重组的DNA不易脱落。
    解析： 暂无解析

  • 第20题：

    单选题
    关于菌种的选育不正确的是（）
    A

    自然选育菌种费时且盲目性大

    B

    诱变育种原理的基础是基因突变

    C

    代谢控制育种方法有转化、转导及杂交

    D

    采用基因工程的方法可构建工程菌


    正确答案： C
    解析： 暂无解析

  • 第21题：

    问答题
    什么是基因工程菌，工程菌构建的基本过程和各阶段的主要任务是什么，所涉及基因工程原理是什么？

    正确答案： 将目的基因导入细菌体内使其表达，产生所需要的蛋白的细菌称为基因工程菌。
    工程菌构建的基本过程如下：目标基因克隆（PCR、文库筛选、化学合成）→表达载体构建（酶切、链接）→遗传转化与筛选（外源基因导入与培养）→工程菌（获得新形状、功能、产生物质）
    酶切：在特异位点上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性片段。（DNA+缓冲液+限制性内切酶；37℃，1小时；加热、加EDTA终止；电泳检查酶切完整性）
    链接：DNA双链上相邻的3’羟基和5’磷酸基团共价结合形成3’-5’磷酸二酯键，使原来断开的DNA缺口重新连接起来。（载体片段和基因片段，缓冲液，连接酶；16-26℃，数小时；70℃加热10min终止反应）
    转化：把外源基因导入宿主细胞的过程。（氯化钙法向大肠杆菌导入外源基因）
    解析： 暂无解析

  • 第22题：

    填空题
    基因工程菌的构建包括（）、（）、（）三个主要环节。

    正确答案： 目标基因的获得,最佳表达载体的构建,工程菌构建
    解析： 暂无解析

  • 第23题：

    问答题
    简述嵌合基因的构建。

    正确答案： 嵌合基因的构建：
    （1）从杂交瘤细胞的基因组文库中筛选功能性可变区基因：破碎杂交瘤细胞，用离心沉淀提取总的RNA、酶切以后，琼脂糖凝胶电泳分离大小为15-20kb的DNA；离心提取入噬菌体EMBL3的DNA并且制备双臂；过夜连接杂交瘤细胞的DNA和入DNA双臂，在体外包装后，感染受体均Q359，铺平板进行入噬菌斑培养；用同一酶切的肝DNA做对照，利用Southern杂交分析基因重组情况。
    （2）PCR扩增VH、VL基因：设计数对简并PCR引物，用于后续的DNA合成；从杂交瘤细胞中离心提取出基因组DNA或RNA，反转录成eDNA：PCR扩增或RT-PCR扩增VH、VL基因并克隆、鉴定。
    （3）嵌合基因的构建，从杂交瘤细胞株基因文库中筛选并鉴别出功能性重链和轻链的可变区基因，将它们分别置换质粒pSVl84 HneoDNSVKHIIK中的EcoRI-EcoRIII片段和HindIII片段，酶切鉴定置换片段的方向，取插入方向正确的质粒。
    解析： 暂无解析

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