单选题PCR的反应体系一般为（）A 100μlB 50μlC 30μlD 20μlE 60μl

第1题：

第2题：

第3题：

简述PCR反应体系主要包括哪些组分。
P.CR反应组分：
①模板（特定序列的DNA分子）。
②两个特异寡核苷酸片段-引物primer，这一对引物位于欲扩增DNA区的两侧，与靶序列两端互补。
③耐热DNA聚合酶Taq酶以及酶的缓冲液-buffer。
④4种脱氧核糖核苷酸dNTP。
略

第4题：

在固定容积的PCR反应体系中，加入越多的模版，PCR反应的效果就会越好。（）

正确答案:错误

第5题：

PCR反应一般分为几个步骤？各步骤有什么特点？

正确答案: A.变性：双链DNA变成单链DNA。变性温度的高低由G+C含量决定；变性时间由DNA链长度决定。常规PCR变性条件为94～95度45s。
B.退火，将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退火结合；退火是使引物和模板DNA复性。复性过程采取的温度（Ta）至关重要。复性温度过高，引物不能与模板很好地复性，扩增效率很低；复性温度太低，引物将产生非特异性复性，导致非特异性的DNA片段的扩增。退火温度通常在比理论计算的引物和模板的熔解温度低3～5℃的条件下进行。
C.延伸：寡核苷酸引物的延长，一般在耐热DNA聚合酶的最适温度下进行。对于Taq酶，为72～78度。
D 循环数：PCR扩增所需的循环数取决于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延伸和扩增的效率。
一般扩展条件：94℃60s 37℃60s 72℃120s，共25-30个循环。

第6题：

PCR反应体系中，较低量的模板导致扩增产量的降低和非特异性扩增的减少。

正确答案:错误

第7题：

简述PCR反应体系，实验中注意的问题。

正确答案:1.PCR原理：PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。
包括3个步骤：
（1）DNA变性：加热使靶DNA双链解离成两条单链。
（2）引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA的两条链的3’末端。
（3）引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸（引物延伸是5’→3’方向）。新合成DNA在新一轮变性解离后形成更多的模版与引物退火，在DNA聚合酶催化行，合成新一轮的靶DNA。每一轮DNA的合成均以所有DNA为模版，靶DNA数量呈指数增加。
2.注意问题：引物
（1）引物长度：15~30bp，常用为20bp
（2）引物扩增跨度：以200~500bp为宜，特点条件下课扩增至10kb
（3）引物碱基：G+C含量以40~60%为宜，太少扩增效果不佳，太多易出血非特异性条带；ATGC最后随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸成串排列
（4）避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性扩增条带
（5）引物3’末端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对
（6）引物中有货最好加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点
（7）引物特异性：引物与核苷酸序列数据库的其他序列无明显同源性
（8）引物量： 每条引物浓度0.1~1μmol或10~100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，过高引起错配和非特异性扩增，增加引物之间形成聚体的机会
P.CR循环次数：循环次数觉得PCR扩增程度。主要取决于模版DNA的浓度。一般的循环次数在30~40次，次数越多，非特异性产物量亦随之增多
设立对照：PCR反应应设立阳性和阴性对照，是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合理的一个重要参考指标。

第8题：

PCR的反应体系一般为（）

• A、100μl
• B、50μl
• C、30μl
• D、20μl
• E、60μl

正确答案:B

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

PCR反应的产物中一般会生成几种长度不同的产物？

正确答案: PCR反应中一般会产生2种不同长度的产物：一种是预期长度的产物，一种是比预期长度长得多的产物；前者以指数级数增加（2的n次方），后者以几何级数增加（2n）。因此后者在总产物中所占比重很小，可忽略不计。

第16题：

PCR中阳性对照没有出现的原因包括（）。

• A、反应体系配制出错
• B、阳性对照失效
• C、反应体系中组分失效
• D、漏加

正确答案:A,B,C,D

第17题：

一般PCR反应中包括几种基本成份？它们的功能分别是什么？

正确答案: 7种基本成分：模板，特异性引物，热稳定DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸（dNTP），二价阳离子，缓冲液及一价阳离子，石蜡油（可忽略）
模板：待扩增的DNA或RNA，甚至细胞；
引物：与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有每条引物都与靶DNA特异性结合，才能保证其特异性，引物越长，特异性越高。两段引物间的距离决定了扩增片断的长度；两引物的5’端决定了扩增产物的5’端位置。说明引物决定了扩增片断的长度、位置和结果。
DNA聚合酶：a.聚合作用，将dNTP中脱氧单核苷酸逐个加到3’-OH末端，b.3’-5’外切酶活性，校正功能，c.5’-3’外切酶活性，切除错配核苷酸；
石蜡油：维持恒热和整个体系中盐浓度，减少PCR过程中尤其是变性时液体蒸发所造成的产物的丢失。

第18题：

什么是PCR，请试述PCR技术的原理，以及PCR的反应过程？

正确答案:P.CR就是聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）。
原理：双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
反应过程：首先。双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子；然后，加入到反映混合物中的引物和模板DNA的特定末端相结合；戒指，DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应混合物中的三种核苷三磷酸，在引物的3’-OH端合成新生的DNA互补链。

第19题：

PCR反应体系中所必需的物质是（）

• A、Taq酶
• B、dNTP
• C、DNA模板
• D、Mg离子
• E、以上都是

正确答案:E

第20题：

双脱氧链末端终止法测序反应中除PCR反应体系成份外，还加入了（）。

• A、DNA聚合酶
• B、dNTP
• C、dNDP
• D、ddNTP
• E、ddNDP

正确答案:D

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：