简述几种DNA测序的方法，比较优缺点。
题目
简述几种DNA测序的方法，比较优缺点。
相似考题
参考答案和解析
正确答案:
1.Sanger双脱氧连终止法；2.Maxam-Gilbert化学降解法；3.DNA自动测序化。
Maxam-Gilbert法所能测定的长度要比Sanger法短一些，它对放射性标记末端250个核苷酸以内的DNA序列效果最佳。Sanger法需要单链模板和特异寡核苷酸，并需获得大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段的高质量酶制剂，而Maxam-Gilbert法只需简单化学试剂。随着M13噬菌体和噬菌粒载体的发展，也由于现成的合成引物唾手可得及测序反应日臻完善，双脱氧链终止法如今远比Maxam-Gilbert法应用得广泛。化学降解较之链终止法具有一个明显的优点：所测序列来自原DNA分子而不是酶促合成所产生的拷贝。因此，利用Maxam-Gilbert法可对合成的寡核苷酸进行测序，可以分析诸如甲基化等DNA修饰的情况。由于Sanger法既简便又快速，因此是现今的最佳选择方案。事实上，目前大多数测序策略都是为Sanger法而设计的。
Maxam-Gilbert法所能测定的长度要比Sanger法短一些，它对放射性标记末端250个核苷酸以内的DNA序列效果最佳。Sanger法需要单链模板和特异寡核苷酸，并需获得大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段的高质量酶制剂，而Maxam-Gilbert法只需简单化学试剂。随着M13噬菌体和噬菌粒载体的发展，也由于现成的合成引物唾手可得及测序反应日臻完善，双脱氧链终止法如今远比Maxam-Gilbert法应用得广泛。化学降解较之链终止法具有一个明显的优点：所测序列来自原DNA分子而不是酶促合成所产生的拷贝。因此，利用Maxam-Gilbert法可对合成的寡核苷酸进行测序，可以分析诸如甲基化等DNA修饰的情况。由于Sanger法既简便又快速，因此是现今的最佳选择方案。事实上，目前大多数测序策略都是为Sanger法而设计的。
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第1题：
CSS主要有几种引用方法？分别是如何实现的？比较各种方法的优缺点。
正确答案: 三种引用方法：
（1）内联式样式单；它利用现有的HTML标记，把特殊样式加入到那些由标记控制的信息中。
（2）嵌入式样式单；和Sript类似，嵌入到HTML晚间的头部中去。
（3）外部式样式单；是一种保存在外部的样式单文件，外部文件以.CSS为扩展名。优缺点：外部样式单的优点在于可以统一整个网站的所有网页样式，只要改动一个外部样式单文件，站内所有引用了该样式单相应样式的页面便都进行了改动，也方便了站点的维护。而嵌入式样式单的作用在于同一整个页面的样式，只需要改动某一个样式的定义，整个页面内的所有文件的相应位置均会改变，有利于统一页面内部的样式。内联式样式单的作用在于简化了HTML标记属性，直接通过CSS控制显示样式，使页面效果横加丰富多彩。 -
第2题：
建筑群布线有几种方法？比较它们的优缺点。
正确答案: 建筑群布线有架空，直埋，和地下管道三种。
架空：架空布线法通常只用于有现成电线杆，而且线缆的走线方式不是主要考虑因素的场合。成本不高，但是这不仅影响美观，而且保密性、安全性和性也差。
直埋：直埋布线方法可以保持建筑物在原貌，直埋布线法优于架空布线法，但扩容或更换线缆时会破坏道路和建筑物外貌，维护费较高。
地下管道：由于管道是用耐腐蚀性的材料做成的，所以这种方法给缙绅提供了最好的机械保护，使受损而维修的机会减少到最低程度。并且能保持建筑物的原貌。 -
第3题：
简述定额法与其他方法比较优缺点、特点。
正确答案:特点：事前制定产品的消耗定额、费用定额及定格成本，据此控制生产费用，降低成本的目标；在生产费用发生时，分别核算复合定额的费用及定个产生的差异，包括脱离现行定额的差异等，以此加强成本的日常核算以及分析、控制，促进生产费用的节约；会计期末，将定额费用和各项成本差异分别归集分配。
优缺点：有利于加强成本的日常控制；有利于企业定期进行成本分析；有利于企业提高定额管理和计划管理水平；有利于差异的分配。工作量较大；适用范围较窄；不便于对各个责任部门的工作情况进行考核和分析。 -
第4题：
简述三种成网方法优缺点比较。
正确答案:干法：应用范围广，投资小、建厂快。
湿法：生产速度高，产品均匀性好，但建厂投资达，水源要求丰富，产品不易更换。
聚合物挤压成网法：产量大，产品强度高，产品更换困难。 -
第5题：
综合生产计划的常用的编制方法有哪几种？试比较各种方法的优缺点。
正确答案: 1.试算法：优点：简便易行。
缺点：很难找到最佳计划方案。
2.输模型法：优点：可以得到最优解。
缺点：不适合追求多目标和存在多约束的场合。
3.线性规划法：优点：多种约束条件，可以得到最优计划方案。
缺点：假定了变量之间必须呈线性关系。 -
第6题：
简述酶固定化技术的几种主要方法，并比较其优缺点。
正确答案:（1）吸附法：通过载体表面和酶分子表面之间的氢键、疏水键和π-电子亲和力等物理作用力，将酶固定于不溶性载体的方法。
（2）结合法：选择适宜的载体，使之通过共价键或离子键，与酶结合在一起的固定化方法，称为结合法。根据酶与载体结合的化学键不同，结合法分为离子键结合法和共价键结合法。
（3）交联法：利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法。
（4）包埋法：将聚合物的单体和酶溶液混合后，借助聚合促进剂（包括交联剂）的作用使单体进行聚合，从而将酶包埋于聚合物中的固定化方法。吸附法的优点是酶的活性中心不易被破坏，且酶的高级结构变化少，酶活力损失很少。缺点是酶与载体相互作用力弱、酶容易从载体上脱落下来。
离子结合法的优点是操作简单，处理条件温和，酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏，能得到酶活回收率高的固定化酶。缺点是载体和酶的结合力比较弱，容易受缓冲液种类或pH的影响，在离子强度高的条件下进行反应时，酶往往会从载体上脱落。
共价结合法的优点是酶与载体结合牢固，稳定性好，一般不会因底物浓度高或存在盐类等原因而轻易脱落，这有利于连续使用。缺点是反应条件苛刻，操作复杂，而且由于采用了比较激烈的反应条件，可能会引起酶蛋白高级结构的变化，破坏部分活性中心，因此往往不能得到比活力高的固定化酶，其酶活回收率一般为30%左右，有时甚至底物的专一性等酶的性质也会因固定化而发生变化。
交联法的优点是操作简便。缺点是交联反应的过程往往比较激烈，许多酶易在固定化过程中失效，酶回收率不高。
包埋法优点是一般不会与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应，很少改变酶的高级结构，故而一般比较安全，酶活回收率较高。缺点是聚合过程中由于自由基的产生、放热以及酶和试剂间可能发生化学反应等，也往往会导致酶的失活。而且只适合作用于小分子底物和产物的酶。
包埋、共价结合、交联三种虽结合力强，但不能再生、回收；物理吸附法制备简单，成本低，能回收再生，但结合差，在受到离子强度、pH变化影响后，酶会从载体上游离下来；包埋法各方面较好，但不适于大分子底物和产物。 -
第7题：
简述平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护。
正确答案: （1）电泳时仪器显示无电流可能原因包括：
①电泳缓冲液配制不正确；②电极导线未接好或损坏；③正极或负极铂金丝断裂；④正极或负极的胶面未浸入缓冲液中。
（2）传热板粘住胶板主要原因为上方的缓冲液室漏液。此时应将上方的缓冲液倒掉，并卸下缓冲
液室，松开胶板固定夹，将传热板顺着胶板向上滑动，直至与胶板分开。清洗传热板，同时检查缓冲液室漏液的原因，并采取相应措施，防止漏液。
（3）其它：
①倒胶前应按照操作要求认真清洗玻璃板，用未清洗干净的胶板倒胶时易产生气泡、或者产生较高的荧光背景；
②配制凝胶时应注意胶的浓度、TEMED含量、尿素浓度等，并注意防止其它物质（尤其是荧光物质）的污染；③倒胶时需注意不能有气泡，用固定夹固定胶板时，四周的力度应均匀一致；
④将待测样品加入各孔前，应使用缓冲液冲洗各孔，把尿素冲去，以免影响电泳效果。 -
第8题：
试比较诱变育种技术、原生质体融合技术、DNA重组三种育种方法的优缺点。
正确答案: 诱变育种：
优点：能提高变异频率，加速育种过程，可大幅度改良某些性状；变异范围广。
缺点：有利变异少，须大量处理材料；诱变的方向和性质不能控制。改良数量性状效果较差。
原生质体融合技术：
优点：
1、二个不同性状的细胞破壁成原生质体，没有细胞壁的阻隔，基因交换变得容易，且可以多次交换，可得到不同重组子。
2、原生质体还可以用紫外线等诱变剂处理，诱变的效果比细胞要好
3、克服远源杂交不融合；
缺点：实验模型的建立（如抗性标记）对结果影响很大
DNA重组：
优点：定向改变微生物性状
缺点：操作复杂，成功率低 -
第9题：
问答题综合生产计划的常用的编制方法有哪几种？试比较各种方法的优缺点。正确答案： 1.试算法：优点：简便易行。
缺点：很难找到最佳计划方案。
2.输模型法：优点：可以得到最优解。
缺点：不适合追求多目标和存在多约束的场合。
3.线性规划法：优点：多种约束条件，可以得到最优计划方案。
缺点：假定了变量之间必须呈线性关系。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题建筑群布线有哪几种方法？试比较它们的优缺点。正确答案： （1）管道布线法，优点是：电缆安全，有最佳的保护措施，延长电缆使用年限；产生障碍机会少，不会影响通信，有利于使用和维护；电缆线路隐蔽好，不会影响环境美观；敷设电缆方便，易于扩建和更换。缺点是挖沟、开管道和建人孔的初次投资较高。
（2）直埋布线法，优点是：提供某种程度的机械保护，保持道路和建筑物外貌整齐，初次投资较低。缺点是扩容或更换电缆时，会破坏道路和建筑物外貌。
（3）架空布线法，优点是施工建筑技术较简单；建筑条件不受限制；能适应今后变动，易于迁移、更换或调整，便于扩建增容；初次工程投资较低。缺点是不能提供机械保护，影响了美观，而且保密性、安全性和灵活性都较差。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题比较两种DNA快速测序的方法，包括方法的原理和优缺点。正确答案： 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的双脱氧法（酶法）及Maxam和Gilbert（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因些上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。然后在可以区分长度仅差一个核苷酸的不同DNA分子的条件下，对各组寡核苷酸进行电泳分析，只要把几组寡核苷酸加样于测序凝胶中若干个相邻的泳道这上，即可从凝胶的放射自影片上直接读出DNA上的核苷酸顺序。 Sanger法DNA测序Sanger 法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP），并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。
S.anger 法测序快速、省事，不需要比强很高的32P-dNTP，但有时会出现一些不够清晰的结果。
M.axam－Gilbert DNA化学降解法
化学降解法的原理是首先标记双链DNA的5’端，然后加入二甲基亚砜并加热到90°C，使双链DNA分子变成单链。通过凝胶电泳分离两条链，其中一条链含有更多的嘌呤成为重链，另一条链为轻链。纯化两条链，分成四份，分别利用不同的降解试剂进行降解（哌啶，氮杂环己烷），产生了一系列的降解片段。可以通过电泳分离显示出来。
化学降解法可以提供比较清晰的结果，但步骤繁琐，许多药品有剧毒。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述酶固定化技术的几种主要方法，并比较其优缺点。正确答案： （1）吸附法：通过载体表面和酶分子表面之间的氢键、疏水键和π-电子亲和力等物理作用力，将酶固定于不溶性载体的方法。
（2）结合法：选择适宜的载体，使之通过共价键或离子键，与酶结合在一起的固定化方法，称为结合法。根据酶与载体结合的化学键不同，结合法分为离子键结合法和共价键结合法。
（3）交联法：利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法。
（4）包埋法：将聚合物的单体和酶溶液混合后，借助聚合促进剂（包括交联剂）的作用使单体进行聚合，从而将酶包埋于聚合物中的固定化方法。吸附法的优点是酶的活性中心不易被破坏，且酶的高级结构变化少，酶活力损失很少。缺点是酶与载体相互作用力弱、酶容易从载体上脱落下来。
离子结合法的优点是操作简单，处理条件温和，酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏，能得到酶活回收率高的固定化酶。缺点是载体和酶的结合力比较弱，容易受缓冲液种类或pH的影响，在离子强度高的条件下进行反应时，酶往往会从载体上脱落。
共价结合法的优点是酶与载体结合牢固，稳定性好，一般不会因底物浓度高或存在盐类等原因而轻易脱落，这有利于连续使用。缺点是反应条件苛刻，操作复杂，而且由于采用了比较激烈的反应条件，可能会引起酶蛋白高级结构的变化，破坏部分活性中心，因此往往不能得到比活力高的固定化酶，其酶活回收率一般为30%左右，有时甚至底物的专一性等酶的性质也会因固定化而发生变化。
交联法的优点是操作简便。缺点是交联反应的过程往往比较激烈，许多酶易在固定化过程中失效，酶回收率不高。
包埋法优点是一般不会与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应，很少改变酶的高级结构，故而一般比较安全，酶活回收率较高。缺点是聚合过程中由于自由基的产生、放热以及酶和试剂间可能发生化学反应等，也往往会导致酶的失活。而且只适合作用于小分子底物和产物的酶。
包埋、共价结合、交联三种虽结合力强，但不能再生、回收；物理吸附法制备简单，成本低，能回收再生，但结合差，在受到离子强度、pH变化影响后，酶会从载体上游离下来；包埋法各方面较好，但不适于大分子底物和产物。解析： 暂无解析 -
第13题：
路由选择一般有哪几种方法？试比较其优缺点。
正确答案: 路由算法有多种，用得较多的有静态的固定路由算法及动态的自适应路由算法。对于小规模的专用分组交换网采用固定路由算法；对于大规模的公用分组交换网采用简单的自适应路由算法，同时仍保留固定路由算法作备用。 -
第14题：
建筑群布线有哪几种方法？试比较它们的优缺点。
正确答案: （1）管道布线法，优点是：电缆安全，有最佳的保护措施，延长电缆使用年限；产生障碍机会少，不会影响通信，有利于使用和维护；电缆线路隐蔽好，不会影响环境美观；敷设电缆方便，易于扩建和更换。缺点是挖沟、开管道和建人孔的初次投资较高。
（2）直埋布线法，优点是：提供某种程度的机械保护，保持道路和建筑物外貌整齐，初次投资较低。缺点是扩容或更换电缆时，会破坏道路和建筑物外貌。
（3）架空布线法，优点是施工建筑技术较简单；建筑条件不受限制；能适应今后变动，易于迁移、更换或调整，便于扩建增容；初次工程投资较低。缺点是不能提供机械保护，影响了美观，而且保密性、安全性和灵活性都较差。 -
第15题：
论述收集电视收视率数据的几种方法，并比较它们的优缺点。
正确答案: 收集电视收视率数据的方法共有四种。
1）日记法就是让电视观众记录下他们看过的电视节目名字，然后把日记邮寄给研究公司。
日记法的优点：是费用相对比较便宜。缺点是真实性难于确定。
2）仪表法
仪表法的缺陷，仪表不能记录下节目放映时是否每个家庭成员者在观看。
3）电话采访回忆法主要是通过电话采访抽取样本，并询问此时他们在看什么电视节目。如果他们肯定回答的话，再追问他们看到的广告商和广告产品。后一个问题是对样本么应的有交性进行的检查。
4）个人采访回忆法。 -
第16题：
简述Sanger DNA测序法的原理。
正确答案: Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：
（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5′端向3′端聚合；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3′羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3′羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。
如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。 -
第17题：
简述几种细胞因子免疫学测定方法及其优缺点。
正确答案:细胞因子的免疫学测定方法包括：
①ELISA法，具有特异、简便、易于标准化等优点，可同时检测大量标本，是细胞因子测定的首选方法。此外，无生物学活性的细胞因子前体、分解片段以及与相应受体的结合物也可用此法检测。其缺点是，敏感性偏低、不能判断细胞因子的生物学活性。
②流式细胞仪法，主要用于细胞内细胞因子和细胞表面黏附分子的检测，能简单、快速地进行单个细胞水平的细胞因子或黏附因子的检测，精确判断不同细胞亚群的细胞因子和膜分子的表达情况。
③酶联免疫斑点试验法，便于观察和计数分泌细胞因子的细胞，一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关。 -
第18题：
比较两种DNA快速测序的方法，包括方法的原理和优缺点。
正确答案:目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的双脱氧法（酶法）及Maxam和Gilbert（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因些上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。然后在可以区分长度仅差一个核苷酸的不同DNA分子的条件下，对各组寡核苷酸进行电泳分析，只要把几组寡核苷酸加样于测序凝胶中若干个相邻的泳道这上，即可从凝胶的放射自影片上直接读出DNA上的核苷酸顺序。 Sanger法DNA测序Sanger 法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP），并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。
S.anger 法测序快速、省事，不需要比强很高的32P-dNTP，但有时会出现一些不够清晰的结果。
M.axam－Gilbert DNA化学降解法
化学降解法的原理是首先标记双链DNA的5’端，然后加入二甲基亚砜并加热到90°C，使双链DNA分子变成单链。通过凝胶电泳分离两条链，其中一条链含有更多的嘌呤成为重链，另一条链为轻链。纯化两条链，分成四份，分别利用不同的降解试剂进行降解（哌啶，氮杂环己烷），产生了一系列的降解片段。可以通过电泳分离显示出来。
化学降解法可以提供比较清晰的结果，但步骤繁琐，许多药品有剧毒。 -
第19题：
目前常用分割基流的方法有哪几种，简述其优缺点？
正确答案: 有斜线分割法及水平分割法等。水平分割法简单，认为洪水期间地下径流消退，与其补充是相等；斜线分割则认为洪水期间地下径流补充量大于地下径流消退量，对于大多数流域来说，这种认识较符合实际。 -
第20题：
问答题简述Sanger DNA测序法的原理。正确答案： Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：
（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5′端向3′端聚合；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3′羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3′羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。
如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题论述收集电视收视率数据的几种方法，并比较它们的优缺点。正确答案： 收集电视收视率数据的方法共有四种。
1）日记法就是让电视观众记录下他们看过的电视节目名字，然后把日记邮寄给研究公司。
日记法的优点：是费用相对比较便宜。缺点是真实性难于确定。
2）仪表法
仪表法的缺陷，仪表不能记录下节目放映时是否每个家庭成员者在观看。
3）电话采访回忆法主要是通过电话采访抽取样本，并询问此时他们在看什么电视节目。如果他们肯定回答的话，再追问他们看到的广告商和广告产品。后一个问题是对样本么应的有交性进行的检查。
4）个人采访回忆法。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题试述比较几种常用抽样方法的优缺点。正确答案：解析： -
第23题：
问答题比较几种常用抽样方法的优缺点。正确答案：解析：