基因诊断的常用技术方法有A.细胞培养 B.基因测序 C. PCR D.核酸分子杂交

第1题：

第2题：

第3题：

试述转基因技术中外源基因的导入的常用方法及其优缺点。

正确答案: （一）显微注射法
（1）利用注射仪把外源DNA直接注入动物卵母细胞、受精卵、早期胚胎、胚胎干细胞、或体细胞的转基因方法。
（2）优点：可准确导入外源基因，转化频率高，鱼体内可达20%，不需载体，直接获得纯系，实验时间短。
（3）缺点：仪器贵重，操作繁琐耗时，一次处理卵很少。
（二）电穿孔转化法
（1）利用高压电脉冲作用，使细胞膜上产生可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的有效导入。电穿孔转化法的效率受电场强度、电脉冲时间和外源DNA浓度等参数的影响。
（2）优点：操作简单，同时处理大量受精卵。
（3）缺点：导入是随机的、无定向的，转移率低。
（三）精子介导法
（1）精子同外源DNA共浴后再给卵子受精，使外源DNA通过受精过程进入受精卵并整合于受体的基因组中。
（2）优点：简便，成本低，便于大量筛选，是近几年转基因动物研究的热点。
（3）缺点：处理后精子的受精能力差异较大、阳性率低、转移不稳定。
（四）基因枪转化法
（1）又称微弹轰击转化法，以高压气体为动力，利用高速运行的金属颗粒轰击细胞，将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随金属颗粒送入细胞的转化方法。
（2）优点：该法简单快速，接触面积大、转化率高，可同时处理多个个体。
（3）缺点：不稳定，表达方面存在问题。
（五）病毒（噬菌体）颗粒转导法
用病毒（噬菌体）DNA（或RT-DNA）构建的克隆载体或携带目的基因的克隆体，在体外包装成病毒（噬菌体）颗粒后，感染受体细胞，使其携带的重组DNA进入受体细胞。
转基因病毒具严格的宿主特异性，且鱼类转基因病毒的分析手段非常落后，此法对鱼类暂不适应。
（六）组织注射法
将外源基因直接向机体组织注射，周围组织能将外源基因纳入，并且注入的外源基因能被整合。

第4题：

列举常用5种不同基因诊断技术，简述其原理及优、缺点。

正确答案: 核酸分子杂交：错配时杂交信号减弱或消失，可用于基因结构和表达检测，须制备合适的探针。
PCR：变异引起扩增产物不同，灵敏度高，须选择合适引物，有假阴性或假阳性结果。
SSCP：突变引起核酸二级结构改变，可检测已知或未知突变，检测的灵敏度被片段长度稀释。
RFLP：基因变异改变酶切图谱，须选择合适的限制性核酸内切酶；当变异没有引起任何酶切结果的改变时，则无法使用。
DNA序列测定：直接检测核酸序列比较差异，最准确的一种诊断方法。
基因芯片：多元杂交分析杂交差异，一次杂交可检测一个样品的多个基因不同突变或表达变化。

第5题：

临床上常用FQ-PCR、bDNA技术、基因芯片、杂交捕获系统和核酸杂交等技术进行感染性疾病的分子诊断，这些方法各有特点，实际应用中应根据需要灵活选择。常用的感染性疾病分子诊断的方法中，灵敏性最高的方法是（）

• A、杂交捕获系统
• B、FQ-PCR
• C、bDNA技术
• D、基因芯片
• E、核酸杂交

正确答案:B

第6题：

目前常用的产前基因诊断技术有哪些？产前基因诊断有何意义？

正确答案:产前基因诊断是指对胎儿实施的基因诊断。目前常用的技术有：
1.DNA分子杂交技术。
2.限制性内切酶酶谱分析技术。
3.限制性片段长度多态性连锁分析技术。
4.聚合酶链反应（PCR）DNA扩增技术。
产前基因诊断技术的发展，从基因水平对某些遗传病的产前诊断、对于优生优育、提高人口素质有极其重要的意义。

第7题：

常用的植物转基因方法有（）、（）、（）等。

正确答案:农杆菌介导转化法；基因枪介导转化法；花粉管通道法

第8题：

基因诊断的常用技术方法不包括（）。

• A、RFLP分析
• B、基因测序
• C、基因剔除
• D、核酸分子杂交
• E、PCR/SSCP

正确答案:C

第9题：

常用的植物转基因方法有（）、（）、（）。

正确答案:农杆菌介导转化法；基因枪介导转化法；花粉管通道法

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

什么是基因诊断？基因诊断中常用的方法有哪些？试简述其中一种方法的原理。

正确答案: 基因诊断是指用分子生物学的技术对引起疾病的原因——遗传基因、致病微生物和寄生虫，以及某些恶性肿瘤在基因水平上进行病原学和细胞遗传基因的检测和分析。基因诊断中常用的方法有核酸分子杂交、PCR、DNA芯片技术、限制酶酶谱分析和DNA序列测定等。
核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是：互补的核酸单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。因此，当用一段已知基因的核酸序列作探针，与变性后的单链基因组DNA接触时，如果两者的碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列。

第16题：

诊断感染性疾病的常用分子诊断技术包括（　）

• A、PCR及其衍生技术
• B、核酸杂交技术
• C、DNA测序
• D、基因芯片
• E、Westernblot

正确答案:A,B,C,D

第17题：

常用的癌基因诊断方法有哪些？

正确答案: ①基因点突变的检测；
②基因扩增的检测；
③表达异常的检测；
④重排、缺失及多态性的检测；
⑤原位杂交。

第18题：

简述基因诊断的常用技术方法和原理。

正确答案:所谓基因诊断，就是以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺失或表达异常，对人体的状态或疾病作出诊断的方法和过程。
基因诊断通常分为对基因突变的诊断、多态性分析和基因表达异常的诊断。常用技术有：1.核酸分子杂交（具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基互补配对原则形成双链的过程。其基本原理是：具有互补序列的两条单链核酸分子在一定条件下（适当温度、离子强度等），按碱基互补配对原则，重新形成双链。）
①Southern印迹法；②Northern印迹法；③斑点杂交；④原位杂交
2.聚合酶链式反应（在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性，人为控制温度——高温变性，低温复性，室温延伸，循环多次后，特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段）
3.单链构象多态性检测（DNA经变性形成单链后，在中性条件下单链DNA会因其分子内碱基之间的相互作用，形成一定的分子构象，相同长度的单链DNA，如果碱基序列不同，形成的构象就不同）
4.限制酶酶谱分析（基因突变可能导致基因上某一限制酶识别位点的丢失或相对位置发生改变，以此酶消化待测DNA和野生型对照DNA，通过比较二者的酶切片段的长度，数量上的差异可判断待测DNA的突变情况）
5.DNA序列测定
6.DNA芯片技术 它们共同的原理为是检测DNA或RNA的结构变化与否，量的多少及表达功能是否正常，以确定被检查者是否存在基因水平的异常变化，以此作为疾病确证的依据
互补链，选中间有三个氢键连接的碱基组合，寄生生物与宿主之间的关系，关于某种遗传病的两道逻辑推理题。还有两题忘了。概念题有四个，答案依次为合成代谢、叶绿素、光合作用第三阶段的电子载体（自己去找）、三羧酸循环。实验设计题一为：关于21三体综合症（唐氏综合症）的早期检查的一个设计（与游离的胎儿DNA在母体血液中有关）；题二为NaOH引起某实验失败的验证的设计；题三为甲基化去甲基化T%含量与构建文库是片段大小成反比的这种实验现象的解释；题四说说基因组学与本学科的展望。

第19题：

常用的目的基因的获取方法有哪些？

正确答案: 制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增目的基因、人工合成DNA技术

第20题：

常用的基因转移的基本技术有哪些？

正确答案: 病毒载体介导的基因转移效率较高，因此它也是使用最多的基因治疗载体。据统计，有72%的临床实验计划和71%的病例使用了病毒载体，其中用得最多的是逆转录病毒载体。
非病毒载体介导的基因转移技术有：
（一）脂质体介导的基因转移技术基本原理：利用阳离子脂质体单体与DNA混合后，可以自动形成包埋外源DNA的脂质体，然后与细胞一起孵育，即可通过细胞内吞作用将外源DNA（即目的基因）转移至细胞内，并进行表达。
（二）受体介导转移技术将DNA与细胞或组织亲和性的配体偶联，可使DNA具有靶向性。
（三）基因直接注射技术如：肌内注射凝血因子Ⅸ基因，可产生血友病所需的凝血因子Ⅸ。此外还有磷酸钙共沉淀，细胞核显微注射，基因枪颗粒轰击，多种物理化学等方法。

第21题：

第22题：

第23题：