构建一个理想的cDNA文库需要考虑的因素有哪些？
题目
构建一个理想的cDNA文库需要考虑的因素有哪些？
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第1题：
关于cDNA文库的叙述，哪些是正确的
A.仅代表构建文库取材细胞当时表达的成套基因
B.同一种细胞在发育的不同阶段构建的文库，它们包含的基因不尽相同
C.正常肝细胞与肝癌细胞构建的cDNA文库,两者包含的基因不尽相同
D. cDNA文库中不包含内含子序列及基因的调控序列答案：A,B,C,D解析： -
第2题：
如何考察确定一个cDNA文库的质量？
正确答案: （1）文库的代表性：是指文库中包含的重组cDNA分子是否能完整地反映出来源细胞中表达的全部信息（即mRNA种类），是体现文库质量的最重要指标。文库的代表性好坏可用一个量化的指标来衡量，即文库的库容量，它是指构建出的原始cDNA文库中所包含的独立的重组子克隆数。
（2）重组cDNA片段的序列完整性：在细胞中表达出的各种mRNA尽管具体的序列不同，但基本上由三个部分组成，即5’端非翻译区，中间的编码序列和3’端非翻译区。 -
第3题：
简述构建cDNA文库的基本操作？
正确答案:（1）细胞总RNA的提取和mRNA分离
（2）第一链cDNA和第二链cDNA合成并连接产生重组DNA
（3）将重组DNA通过载体转入适当的宿主
（4）筛选鉴别重组克隆
（5）扩增和保存文库 -
第4题：
请设计试验，构建理想的小鼠基因组文库。
正确答案:一、分离纯化基因组DNA。用小鼠的肝脏来提取DNA：
①取适量的新鲜肝脏制备组织匀浆。
②加入细胞裂解液使细胞充分的裂解。
③加入蛋白酶K消化细胞，注意混匀但是不能太剧烈以免DNA断裂。
④加氯仿去除蛋白质。混匀后离心后，分三层上层是DNA，这一步吸取上层时最好用剪过的枪头避免吸入蛋白质等杂质。
⑤加入异丙醇出现絮状物，离心去除上清液，加入氯化钠溶解沉淀，加入RNA酶去除RNA。
⑥乙醇洗涤DNA沉淀，并用TE缓冲液溶解。
⑦琼脂糖电泳检测DNA的质量。
二、切割DNA成合适的片段以用于克隆。将DNA切割成大小为4~10kb的片段。
三、载体DNA的制备。用λ噬菌体载体。载体用Sau3A酶解，用氯化铯密度梯度离心。
四、基因组DNA与载体连接。连接反应中要考虑两个因素，即噬菌体两臂DNA插入片段的比例和反应混合液中DNA的浓度。
五、利用体外包装系统将多联体组装成完整的颗粒。
六、重组载体转化受体感受态细胞
七、扩增DNA文库。大肠杆菌的液体培养基的培养。
八、基因组文库的鉴定。 -
第5题：
下列关于cDNA文库和该生物基因组文库的说法中，不正确的是（）
- A、cDNA文库中的基因都没有启动子，而基因组文库中的基因有启动子
- B、一种生物的基因组文库只有一种，但是cDNA文库可以有多种
- C、获得cDNA文库中的DNA和基因组文库中的DNA所需的酶相同
- D、cDNA文库中某个基因与基因组文库中某个基因控制的性状可能相同
正确答案:C -
第6题：
cDNA文库和基因组文库的主要差别有哪些？
正确答案: （1）基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列；cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因。
（2）基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响；cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列，因它受发育和调控因子的影响。
（3）基因组文库中的编码基因是真实基因，含有内含子和外显子，而cDNA文库克隆的是不含内含子的功能基因。 -
第7题：
基因文库和cDNA文库有何不同，为什么要建立cDNA文库？
正确答案:基因文库是指整套由基因组DNA片段插入克隆载体获得的分子克隆之总和。cDNA文库是指细胞全部mRNA逆转录成cDNA并被克隆的总和。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。 真核生物的基因是断裂的，需经RNA转录后加工过程才使编码序列拼接在一起；真核生物的基因不能直接在原核生物中表达，只有加工成熟的mRNA经逆转录合成的cDNA接上原核生物表达控制元件，才能在原核生物中表达；另外，真核生物细胞中只有一小部分mRNA进行表达，mRNA的稳定性差。因此，需要构建cDNA文库，用于基因表达等方面的研究。 -
第8题：
什么是cDNA文库法？它的构建流程是什么？
正确答案: cDNA：指体外用逆转录酶催化，以mRNA为模板合成的互补DNA。
cDNA文库：汇集某生物成熟mRNA为模板逆转录而成cDNA序列的的重组DNA群体.Λ噬菌体和质粒为载体构建。
操作程序
（1）总RNA的提取；注意抑制RNA酶的活性，盐酸胍，二乙基焦碳酸；
（2）mRNA的分离：选用高度分化的组织，末端带有polyA；
（3）cDNA双链的合成；
（4）cDNA与载体的连接；
（5）噬菌体的包装以及转染或质粒的转化。 -
第9题：
单选题重组DNA技术中，目的基因的获取方法不包括（）A通过PCR合成
B化学直接合成
C构建cDNA文库
D构建基因组文库
E从基因组DNA中直接提取
正确答案： C解析： 暂无解析 -
第10题：
填空题构建基因组文库时连接方法主要是（）；而构建 cDNA 文库，可用（）；或（）。正确答案： 黏性末端连接,接尾连接法,人工接头连接法解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题基因文库和cDNA文库有何不同，为什么要建立cDNA文库？正确答案： 基因文库是指整套由基因组DNA片段插入克隆载体获得的分子克隆之总和。cDNA文库是指细胞全部mRNA逆转录成cDNA并被克隆的总和。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。 真核生物的基因是断裂的，需经RNA转录后加工过程才使编码序列拼接在一起；真核生物的基因不能直接在原核生物中表达，只有加工成熟的mRNA经逆转录合成的cDNA接上原核生物表达控制元件，才能在原核生物中表达；另外，真核生物细胞中只有一小部分mRNA进行表达，mRNA的稳定性差。因此，需要构建cDNA文库，用于基因表达等方面的研究。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题构建一个理想的cDNA文库需要考虑的因素有哪些？正确答案： A.cDNA文库的质量
（1）文库的代表性：是指文库中包含的重组cDNA分子是否能完整地反映出来源细胞中表达的全部信息（即mRNA种类），是体现文库质量的最重要指标。
（2）重组cDNA片段的序列完整性：5’端非翻译区，中间的编码序列和3’端非翻译区，文库中重组cDNA片段尽可能完整的反应出天然基因的结构，cDNA是否完整，对文库使用价值的影响并不是绝对的 完整性这一指标要根据研究目的及筛选方法来灵活考虑，使细胞中表达出的mRNA在构建的cDNA文库中尽可能含有相应其各部分序列的重叠cDNA片段是其中一种折中的做法。
B.文库筛选可选择的具体方法，决定文库筛选方法的主要因素是
1.构建文库的克隆载体系统；
2.相应的宿主细胞系统。
最理想的情况是对于具体构建出的一个cDNA文库，应能够使用多种筛选方法，有效地分离鉴定出目的基因，从而使研究者能够在已有研究条件上，在文库筛选的具体方法上有灵活的选择余地。解析： 暂无解析 -
第13题：
重组DNA技术中，目的基因的获取方法不包括（）
- A、通过PCR合成
- B、化学直接合成
- C、构建cDNA文库
- D、构建基因组文库
- E、从基因组DNA中直接提取
正确答案:E -
第14题：
简述cDNA的扣除文库的构建。
正确答案: 将两种不同组织来源的mRNA进行比较，用扣除杂交排除相同部分，即共同表达的那部分mRNA，选出有差异的、特异表达的mRNA，构建成的cDNA文库。
构建过程：从两种不同类型的细胞T、D分别提取mRNA，T细胞mRNA逆转录合成单链的cDNA，向T细胞cDNA中过量加入D细胞总mRNA。
两者有共同序列的mRNA和cDNA形成mRNA-cDNA杂合分子，余下单链cDNA代表了仅仅存在于T细胞表达的基因信息。 -
第15题：
请举例说明构建噬菌体cDNA文库的主要操作。
正确答案:先提取mRNA，反转录成cDNA。
再把cDNA进行PCR扩增，导入感受态大肠杆菌。
送测——把连接好的大肠杆菌，扩大培养，提取好的大肠杆菌送到测序公司测序。公司有大肠杆菌的序列，不符合的就是转录进去的cdna序列。 -
第16题：
M13噬菌体适用于（）。
- A、构建基因组文库
- B、构建cDNA文库
- C、克隆较大的DNA片段
- D、克隆单链外源DNA片段进行序列分析
- E、以上都对
正确答案:D -
第17题：
构建cDNA文库需要用到哪些工具酶？
正确答案: 逆转录酶，DNA聚合酶I，单链核酸酶S1，末端转移酶，限制性核酸内切酶，DNA连接酶。 -
第18题：
cDNA library:cDNA文库
正确答案: 是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。 -
第19题：
简述cDNA文库构建步骤。
正确答案: （1）酶促合成法制取cDNA，（2）从组织或细胞中制备总RNA和mRNA，（3）合成cDNA第一条链（4）cDNA第二条链的合成 -
第20题：
用逆转录方法构建的cDNA文库不具有（），但有启动子与终止子。
正确答案:内含子 -
第21题：
单选题根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等。在下列文库中，（）属 cDNA 文库。AYAC文库
BMAC文库
C扣减文库
DBAC文库
正确答案： C解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题简述cDNA文库的构建过程。正确答案： 构建cDNA文库的主要步骤：
①mRNA分离；
②cDNA第一链合成；
③cDNA第二链合成
④载体与cDNA的连接；
⑤噬菌体的包装及转染；
⑥cDNA文库的扩增和保存。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题在构建cDNA文库时，为什么常用GC接尾而不用AT接尾法连接？正确答案： GC接尾法，可通过载体的PstI的切点回收外源片段，而AT接尾尚无回收的好办法。解析： 暂无解析