适用于蛋白质的分离纯化，自不至于使其变性的方法为（）A、醇提水沉法B、盐析法C、酸碱法D、水提醇沉法E、离心分离法

第1题：

第2题：

第3题：

第4题：

盐析法适用于蛋白质类药物的分离纯化。

正确答案:正确

第5题：

以生物组织为原料提取纯化多肽和蛋白质，在选择分离纯化方法时应注意哪些问题？

正确答案:（1）根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质；
（2）根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质；
（3）根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质；
（4）根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质；
（5）根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质；
（6）根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质；
（7）根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质；
（8）根据蛋白质选择性吸附性质来纯化蛋白质；
（9）根据蛋白质的某些特殊性质进行纯化。

第6题：

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？

正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。

第7题：

分离纯化蛋白质的方法有：（）法，（）法，（）法，（）法及（）法等。

正确答案:分级沉淀；透析；层析；凝胶过滤；电泳

第8题：

常见蛋白质分离纯化的方法有哪些？

正确答案:按照分子大小：透析、超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤
按照溶解度差别：等电点沉淀法、盐析、有机溶剂沉淀
按照电荷不同分：电泳、离子交换
蛋白质选择吸附分：结晶磷酸钙
配体特异性分：亲和层析

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

盐析法可使蛋白质沉淀，但不引起变性，所以盐析法常用于蛋白质的分离纯化。

正确答案:正确

第16题：

比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。

正确答案:凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术，但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进入凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质，具体操作是将样品装入透析袋，然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。

第17题：

试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。

正确答案: 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。

第18题：

根据溶解度不同，蛋白质有几种分离纯化方法。

正确答案: 利用蛋白质溶解度的差异是分离蛋白质的常用方法之一。影响蛋白质溶解度的主要因素有溶液的pH值、离子强度、溶剂的介电常数和温度等。
1）等电点沉淀蛋白质在等电点时溶解度最小。单纯使用此法不易使蛋白质沉淀完全，常与其他方法配合使用。
2）盐析沉淀中性盐对蛋白质胶体的稳定性有显著的影响。一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。有时不同的盐浓度可有效地使蛋白质分级沉淀。通常单价离子的中性盐（NaCl）比二价离子的中性盐[（NH₄）₂SO₄]对蛋白质溶解度的影响要小。
3）低温有机溶剂沉淀法在一定量的有机溶剂中，蛋白质分子间极性基团的静电引力增加，而水化作用降低，促使蛋白质聚集沉淀。此法沉淀蛋白质的选择性较高，且不需脱盐，但温度高时可引起蛋白质变性，故应注意低温条件。一般在0～40℃之间，多数球状蛋白的溶解度随温度的升高而增加；40～50℃以上，多数蛋白质不稳定，并开始变性。因此对蛋白质的沉淀一般要求低温条件。

第19题：

根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化方法有：热变性法、酸碱变性法、（）

正确答案:表面变性法

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：